链球菌G蛋白(简称SPG)是G、C型链球菌细胞壁中的一种蛋白质,能特异性地同免疫球蛋白IgG分子的Fc段结合,广泛用于单克隆抗体和多克隆抗体的纯化。
使用SPG柱纯化抗体时,从柱上脱落的SPG可能成为污染物。所以对洗脱样品进行脱落SPG的检测十分必要。ELISA检测脱落SPG的过程中,样品中混杂的脱落SPG会与抗体形成SPG-IgG复合物,增大SPG定量检测的难度。因此,解除上述复合物产生的影响是准确测定脱落SPG的关键。
本试剂盒利用“三层夹心”原理,并预先将SPG检测用特制抗体包被在酶标板上。SPG结合酶标板后,用辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗体去结合SPG,后用TMB显色底物进行显色。TMB在HRP的催化下转化为蓝色,并在酸的终止作用下终转化为黄色。在一定的SPG浓度范围内,其颜色深浅与样品中SPG的含量呈正比。用酶标仪测定450 nm波长下的吸光度(OD值),根据SPG浓度标准曲线可以计算出样品中含有的脱落SPG量。